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本试剂盒适用于从各种高淀粉含量的植物种子样品中提取可溶性蛋白。如水稻、荞麦、玉米、小麦等。提取过程简单方便。

本试剂盒提取的蛋白样本不含有高浓度的盐成分，可直接用于等电聚焦、双向电泳，如下游实验需要直接用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用我公司其他货号的试剂盒。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 将适量待提取种子样本剥皮，用PBS或纯水洗涤3次。
  
• 将样本置研钵液氮充分研磨。
  注：没有液氮研磨条件也可直接用提取液A研磨。
  
• 加入500μL蛋白提取液A充分混匀。移入离心管。
  
• 将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟～60分钟。
  
• 在4℃，15000×g离心20分钟。
  
• 收集上清，弃沉淀。
  
• 取5mL离心管，加入500μL离心上清，再加入2mL试剂B，500μL试剂C，1.5mL试剂D，涡旋20秒充分混匀。
  
• 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
  
• 在4℃，11000×g条件下离心15分钟。
  
• 小心移除上层清液丢弃，收集中下层含蛋白层。
  
• 在4℃，15000×g以上条件下离心20分钟。
  
• 弃上清，收集沉淀。
  
• 用50～200μL试剂E充分溶解蛋白沉淀。
  注：也可直接用等电聚焦用水化上样缓冲液过夜溶解蛋白沉淀。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心20分钟。
  
• 收集上清用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。